測定意義：

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中，能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉磷?；磻?，在能量運轉、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用，是臨床診斷心腦疾病的一個(gè)重要指標。

測定原理：

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH，導致340nm光吸收值增加。

組成：

試劑一：粉劑1瓶，4℃避光保存，使用前加10蒸餾水溶解。

工作液：臨用前根據用量將試劑一和試劑二以1:1混合。使用前37℃溫育2min。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積()為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心15min。

2. 血清樣本：直接測定。

測定步驟：

1. 酶標儀預熱30min，調節波長(cháng)至340nm。

2．在96孔板中加入40μl樣本和60μl蒸餾水，最后加入100μl工作液，立即混勻，37℃下測定初始吸光值A1與1min后的吸光值A2，ΔA＝A2-A1。

CK酶活性計算：

（1）按組織蛋白含量計算

酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

CK活性（nmol/min/ mg prot）=×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 1608×△A÷Cpr

（2）按組織樣本質(zhì)量計算：

酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每克樣品1min內催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

CK活性（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 1608×△A÷W

（3）按血清計算：

酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每升血清1min內催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

CK活性（nmol/min/）=×V反總÷V樣÷T= 1608×△A

：NADPH摩爾消光系數，6220 L /mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應體系總體積，0.2；V樣：反應體系中樣本體積，0.04；T，反應時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

1. 配制好的工作液4℃穩定7天，請配制后盡快使用。

2. 血清的CK不穩定，采集樣本后盡快測定，4℃避光保存可穩定24h。

3. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定，可選用BCA蛋白含量測定試劑盒進(jìn)行測定。

4. OD值大于0.5可用提取液適當稀釋樣品，并在計算公式中相應的改變稀釋倍數。