測定意義：

α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中，催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖，不僅與細胞壁的松弛或加固有關(guān)，而且與細胞識別和一些信號分子產(chǎn)生密切相關(guān)。

測定原理：

α-GC分解對-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過(guò)測定吸光值升高速率來(lái)計算α-GC活性。

組成：

試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入12ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長(cháng)至400nm，蒸餾水調零。

2、 加樣表

充分混勻，放入37℃準確水浴30min后，立即放入95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變），8000g，4℃，離心5min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）

充分混勻，室溫靜置2min后， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。

每個(gè)測定管需設一個(gè)對照管。

α-GC活力計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/ml），y為吸光值。

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GC活性(nmol/min/10⁴cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T

=0.114×(ΔA +0.0027)

V反總：反應體系總體積，0.3ml；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.03ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬(wàn)；T：反應時(shí)間，30min。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/ml），y為吸光值。

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

α-GC活性(nmol/min/10⁴cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T

 =0.171×(ΔA +0.0027)

V反總：反應體系總體積，0.3ml；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.03ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬(wàn)；T：反應時(shí)間，30min。