正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

β-GC（EC 3.2.1.21）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中，催化β-糖苷鍵水解，具有多方面生理作用：在纖維素的糖化作用中，β-GC負責進(jìn)一步水解纖維素二糖和纖維素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯類(lèi)香氣前驅體，使糖苷鍵合態(tài)變成游離態(tài)。從而產(chǎn)生香味；β-GC能夠水解植物體內野黑櫻苷，釋放HCN，從而防止昆蟲(chóng)取食。

測定原理：

β-GC分解對-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過(guò)測定吸光值升高速率來(lái)計算β-GC活性。

組成：

試劑一：粉劑×2瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入10ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、培養液、血清（漿）等液體樣本：直接檢測。

測定步驟：

1、 分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至400nm，蒸餾水調零。

2、 加樣表

迅速混勻，放入37℃準確水浴30min后，立即放入95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變），8000g，4℃，離心5min，取上清液

充分混勻，室溫靜置2min后， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管需設一個(gè)對照管。

β-GC活力計算：

標準條件下測定的回歸方程為y =0.00543x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/ml），y為吸光值。

（1）按液體體積計算：

單位的定義：每ml樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

β-GC活性(nmol/min/ml)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V反總]÷V樣÷T

=61.39×(ΔA+0.0027)

（2）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。

β-GC活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

（3）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。

β-GC活力(nmol/min /g鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W

（4）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。

β-GC活力(nmol/min /10⁴ cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T

=0.123×(ΔA +0.0027)

V反總：反應體系總體積，1ml；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬(wàn)；T：反應時(shí)間，30min。