產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

谷物淀粉中的直鏈淀粉最常見(jiàn)的測定方法是對直鏈淀粉的碘結合能力進(jìn)行電位法、電流法或比色法測量，從而形成直鏈淀粉-碘包合復合物。然而，這些方法存在不確定性。支鏈淀粉-碘復合物也會(huì )形成，它們會(huì )降低通過(guò)非比色法測量的游離碘的濃度，并且可能會(huì )在與比色法中的直鏈淀粉-碘復合物相似的波長(cháng)處吸收。

本試劑盒利用伴刀豆球蛋白A只與支鏈淀粉結合而不與直鏈淀粉結合的特性，使其分離，再用僅水解淀粉的酶復合物使淀粉水解為葡萄糖，通過(guò)檢測葡萄糖含量得到直鏈、 支鏈和總淀粉的含量。

保存條件：

未配制前在規定存儲條件下6個(gè)月內有效，配制使用后在規定存儲條件下3個(gè)月內有效。（各組分詳細儲存條件見(jiàn)瓶身）

試劑盒組成與配置：

1. 所需的儀器和用品：

2. 酶標儀、196孔板、水浴鍋、可調式移液器、冰、 二甲基亞砜（DMSO,分析級）、乙醇、乙酸和蒸餾水

2. 需配試劑：

乙酸鈉緩沖液（100 mM，pH 4.5）：

向900 ml蒸餾水中添加5.9 ml冰醋酸（1.05 g/ml）。通過(guò)添加1 M（4 g/100 ml）氫氧化鈉溶液（需要大約30 ml），將pH值調節至pH 4.5，加入0.2g疊氮化鈉，調節體積至1L，室溫下穩定2年以上。

濃縮ConA溶劑（600 mM，pH 6.4醋酸鈉緩沖液）：

稱(chēng)取49.2 g無(wú)水乙酸鈉，175.5 g氯化鈉，0.5 g 二水合氯化鈣，0.7 g六水合氯化鎂和0.7 g 四水合氯化錳，后加入900ml蒸餾水。逐滴加入冰醋酸，調節pH至6.4（不能低于 6.4，否則重新配置），然后

用蒸餾水將其定容至1L。（在4℃下穩定2周）

  ConA溶劑（工作濃度）：用蒸餾水將30ml濃縮ConA溶劑稀釋至100ml（比例為3 ：7），現用現配。

淀粉含量測定：

1.準確稱(chēng)量淀粉或面粉樣品10mg，放入 旋蓋式樣品管中。(注意：每個(gè)批次都包括一個(gè)參考樣品，復制每五個(gè)測試樣品）

2.向試管中加入0.5ml DMSO，同時(shí)在渦旋混合器上以低速輕輕地攪拌，蓋上管子，在沸水浴中加熱，直到樣品完全分散（約1分鐘），確保沒(méi)有凝膠狀的淀粉塊存在。

3.在渦旋混合器上高速攪拌密封管中的內容物，并將管子放入沸水中。渦流混合器，將試管置于沸水浴中，加熱15min，并用渦旋混合器間歇性高速攪拌。

4. 加熱結束后立即加入 1 ml 乙醇（95%(v/v)），在渦旋混合器上加入，防止結塊，在渦旋混合器上持續攪拌。再加入2 ml 乙醇（95%(v/v)），蓋上管子并倒置以混合，淀粉沉淀會(huì )形成，讓試管靜置 15min。（如果需要，可以過(guò)夜）

5. 將試管以2,000g離心5分鐘，棄去上清液，在紙巾上瀝干10min，確保所有的乙醇都已排空，將顆粒用于在隨后的直鏈淀粉和總淀粉測定中。

注意：每批樣品中都包括一個(gè)參考樣品，重復的每五份測試樣品都要重復。

6. 將1ml DMSO（輕輕渦旋混合）加入淀粉顆粒中。將試管放在沸水浴中15min，并不時(shí)攪拌，確保沒(méi)有凝膠狀的塊狀物。

7. 將試管從沸水浴中取出后，立即加入2ml ConA溶劑，充分混合，然后定量轉移試管。將試管內容物定量轉移（用ConA溶劑反復洗滌）到25 ml容量瓶中，并定容至12.5ml，即為待測液。注：若是谷物樣本，第6步得到的溶液中有雜質(zhì)，需待自然冷卻 5min 后于3000rpm 室溫（25℃，低于 10℃會(huì )結凍）離心 5min，上清液備用；若是純淀粉樣本，第6步得到的 溶液呈澄清狀，不需離心自然冷卻 5min 備用（此步驟對于檢測結果是必要的）注意：該溶液應在2小時(shí)內進(jìn)行分析。

上機檢測：

（1）.酶標儀預熱 30min 以上，條件波長(cháng)至 510nm，空白檢測管調零。

（2）.直鏈淀粉上清液制備，在 EP 管中依次加入：

（3）.總淀粉上清液制備，在 EP 管中依次加入：

（4）.顯色反應：

反應結束后將0.2ml液體轉移至96孔板中，于510nm處讀數；

計算：

直鏈淀粉 % (w/w)= 吸光度（直鏈淀粉） ×6.15 ×100

                   吸光度（總淀粉）     9.2  1

                 = 吸光度（直鏈淀粉） ×66.8

                   吸光度（總淀粉）     

其中6.15和9.2分別是直鏈淀粉和總淀粉提取物的稀釋系數，淀粉提取物的稀釋系數。

注意事項：

1、二甲亞砜作為皮膚刺激物，因此應謹慎使用。它通過(guò)皮膚吸收，會(huì )對皮膚和眼睛造成刺激。使用時(shí)穿戴防護品并避免濺出溶劑，盡可能在通風(fēng)柜中使用。

2. 刀豆球蛋白 A 通過(guò)吸入、皮膚接觸和攝入有害。影響可能是不可逆的并且可能涉及致畸作用。處理結晶 Con A 時(shí)穿戴適當的防護用品，處理含有 Con A 的溶液時(shí)佩戴手套。