正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

蔗糖是植物光合作用的主要產(chǎn)物，也是糖分運輸和儲藏的主要形式。因此，測定蔗糖含量對于植物糖代謝具有重要意義。此外，蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標之一。

測定原理：

先用堿與樣品共熱，破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖進(jìn)一步與間苯二酚反應，生成有色物質(zhì)，在480nm下有特征吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

蔗糖提取：

稱(chēng)取0.1~0.2g樣本，常溫研碎，加入0.5ml提取液，適當研磨后快速轉移到離心管中，置于80℃水浴鍋中10min，振蕩3~5次，冷卻后，4000g，常溫離心10min，取上清，加入2mg試劑五，80℃脫色30min，再加入0.5ml提取液，冷卻后，4000g，常溫離心10min，取上清液測定。

測定步驟：

1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長(cháng)至480nm，蒸餾水調零。

2、 樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

   混勻，沸水浴煮沸5min左右（蓋緊，防止水分散失）

混勻，沸水浴30min，冷卻后取200μl至微量石英比色皿或96孔板中測定480nm處光吸收值，空白管、標準管和測定管分別記為A1、A2和A3?？瞻坠芎蜆藴使苤灰鲆还?。

蔗糖含量計算：

1、按照蛋白質(zhì)含量計算

蔗糖含量(mg/mg prot)=(C標準管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行測定蛋白濃度。

2、按照樣品質(zhì)量計算

蔗糖含量(mg/g鮮重)=(C標準管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。

C標準管：標準管濃度，1mg/ml；V1：加入樣本體積，0.025ml；V2：加入提取液體積，1ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

注意：最低檢測限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot