測定意義：

蔗糖轉化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據最適 pH，將高等植物Ivr分為酸性轉化酶（AI）和中性轉化酶（NI）兩種類(lèi)型。                           

NI主要存在于細胞質(zhì)中，負責分解細胞質(zhì)中蔗糖為果糖和葡萄糖。

測定原理：

NI催化蔗糖分解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內510nm光吸收值與還原糖生成量成正比。通過(guò)光吸收增加速率來(lái)計算NI活性

組成：

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入10ml試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

測定步驟和加樣表：

1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長(cháng)至510nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻， 37℃準確水浴30min后，95℃水浴10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）

混勻，95℃水浴10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中， 510nm處記錄各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測定（計算公式中乘以相應稀釋倍數），ΔA=A測定-A對照。每個(gè)測定管需設一個(gè)對照管。

NI活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x為標準品濃度（μg/ml），y為吸光值。

（1）按蛋白濃度計算：

單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

NI活性（μg/min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2）按鮮重計算：

單位的定義：37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

NI活性（μg/min /g 鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W 

V1：加入反應體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應時(shí)間，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001；x為標準品濃度（μg/ml），y為吸光值。

（1）按蛋白濃度計算：

單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

NI活性（μg/min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2）按鮮重計算：

單位的定義：37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

NI活性（μg/min /g 鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W 

V1：加入反應體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應時(shí)間，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。