測定意義：

高鐵還原酶（ferric-chelate reductase, FCR）催化高價(jià)鐵螯合物中的Fe3+還原為Fe2+，在部分物種鐵元素的吸收中有重要作用。

測定原理：

FCR催化Fe³⁺還原為Fe²⁺，Fe²⁺和ferrozine反應顯色，在562nm下有特征吸光值。

試劑組成和配制：

需自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：水（ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml蒸餾水），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長(cháng)至562nm，蒸餾水調零。

2、工作液配制：將試劑一、二、三以1:1:1的比例混合。臨用前配制，用多少配多少。

在微量石英比色皿/96孔板中，加入50μl樣本上清和150μl工作液，混勻，記錄初始吸光值A1和30min后的吸光值A2。ΔA=A2-A1。

FCR活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997；

按樣本質(zhì)量計算

單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷ 8.0014×1000×V標÷(V樣÷V樣總×W)÷T = 4.166×（△A-0.0011）÷W

按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V標÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T=4.166×（△A-0.0011）÷Cpr

V樣總：加入提取液體積，1 ml；V樣：反應中樣品體積，50μl；V標：加入標準品體積 ，50μl；T：反應時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；1000，μmol到nmol的轉換系數。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線(xiàn)：y = 4.0007x + 0.0011，R2 = 0.9997；y，吸光度

按樣本質(zhì)量計算

單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V標÷(V樣÷V樣總×W)÷T=8.331×（△A-0.0011）÷W

按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V標÷(V樣÷V樣總×W)÷T =8.331×（△A-0.0011）÷Cpr

V樣總：加入提取液體積，1 ml；V樣：反應中樣品體積，50μl；V標：加入標準品體積 ，50μl；T：反應時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；1000，μmol到nmol的轉換系數。