測定意義：

DHAR存在于細胞質(zhì)、線(xiàn)粒體和葉綠體中。DHAR催化GSH還原DHA生成AsA和GSSG，調控細胞AsA/DHA比值，是抗壞血酸-谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶。提高植物體內的 DHAR 活性，可提高植物食品中AsA含量，進(jìn)而提高植物食品的營(yíng)養品質(zhì)。

測定原理：

DHAR催化GSH還原DHA生成AsA，通過(guò)測定DHA減少速率，計算DHAR活性。

組成：

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃保存。臨用前加入5ml蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5ml蒸餾水充分溶解。

自備儀器和用品：

研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、可調式移液器和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1. 按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；8000g 4℃離心20min，取上清液置冰上混勻待測。

3.  血清等液體：直接測定。

DHAR測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到265nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二在25℃水浴鍋中預熱30 min。

3. 在1ml石英比色皿中依次加入100μl試劑三、100μl試劑四和700μl 試劑二，最后加100μl上清液，迅速混勻后于265nm比色，記錄30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A2-A1。

DHAR活性計算公式：

(1). 按蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×10⁹÷(Cpr×V樣)÷T

= 92×△A ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/g鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×10⁹÷(W×V樣÷V樣總)÷T

= 92×△A ÷W

(3). 按細胞數量計算

活性單位定義：25℃中每10⁴個(gè)細胞每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/10⁴ cell) = △A÷ε÷d×V反總×10⁹÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

= 92×△A ÷細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：25℃中每毫升樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/ml) = △A÷ε÷d×V反總×10⁹÷V樣÷T

= 92×△A

ε ：AsA在265nm處摩爾吸光系數為5.42×10⁴ L/mol /cm；10⁹：摩爾分子換算成納摩爾分子；d：比色杯光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，1ml=0.001 L；V樣：反應體系中加入上清液體積，100μl =0.1ml；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應時(shí)間，2 min。

注意事項：

臨用前配制的試劑未使用完的4℃保存，3天內使用完。