測定意義：

ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱(chēng)無(wú)機磷酸，常見(jiàn)于巨噬細胞的溶酶體內。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。

測定原理：

在酸性環(huán)境中，ACP催化對硝基苯磷酸二鈉水解生成4-硝基苯酚，在405nm有特征光吸收；通過(guò)測定405nm吸光度增加速率，來(lái)計算ACP活性。

組成：

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、臺式離心機、分析天平、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、冰、可調式移液器和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、10000g離心10min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：按照細菌或細胞數量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到405 nm。

2. 在 EP 管中加入下列試劑

混勻，吸取 1 ml 加入玻璃比色皿中，405 nm 下測定各管吸光值。ΔA=A測定管-A對照管。

注意：每個(gè)測定管需做一個(gè)對照管。

ACP活性計算：

標準曲線(xiàn) y = 14.6672x + 0.0179；R² = 0.9996；x為標準品濃度（μmol/ml），y為吸光值ΔA。

1. 血液中ACP活性計算

活性單位定義：30℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚定義為1個(gè)酶活單位。

ACP活力(μmol/min/ml)=（ΔA-0.0179）÷14.6672 ×V反總÷T÷V樣

= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）

2. 組織、細菌或細胞中ACP活性計算

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：30℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 μmol 4-硝基苯酚定義為1個(gè)酶活單位。

ACP活力(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V反總÷T÷(V樣×Cpr)

=0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：30℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯酚定義為1個(gè)酶活單位。

ACP活力 (μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V反總÷T÷(W×V 樣÷V 樣總)

= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷W

（3）按照細菌或細胞數量計算

活性單位定義：30℃中每10⁴個(gè)細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯酚定義為1個(gè)酶活單位。

ACP活力 (μmol/min/10⁴ cell)=(ΔA-0.0179)÷14.6672 ×V反總÷T ÷（細胞數量×V 樣÷V 樣總）

= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷細胞數量

V反總：反應體系總體積（ml），1 ml； W ：樣品質(zhì)量，g； V樣：加入反應體系中樣本體積（ml），0.01 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反應時(shí)間（min），30 min；500：細胞或細菌總數，500萬(wàn)。

注意事項：

ACP不穩定，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當天準備；血清樣品中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。