【產(chǎn)品用途】本產(chǎn)品可應用于核酸 RNA 的快速擴增。

【檢測原理】本產(chǎn)品是基于重組酶介導鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA）技術(shù)開(kāi)發(fā)的恒溫核酸擴增檢測試劑，在42℃恒溫條件下特異識別并擴增目標樣本的RNA片段，用瓊脂糖凝膠電泳檢測判斷。

【技術(shù)原理】重組酶介導鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA），是一種恒溫核酸快速擴增技術(shù)。 RT-RAA先利用逆轉錄酶將 RNA 逆轉錄成 cDNA，從細菌或真菌中獲得的重組酶在常溫下可與引物DNA緊密結合，形 成重組酶/引物復合體，侵入RNA-cDNA雙鏈核酸模板，在侵入位點(diǎn)重組酶將雙鏈打開(kāi)，同時(shí)單鏈結合蛋白結合到被重 組酶打開(kāi)的單鏈上，維持雙鏈模板處于開(kāi)鏈狀態(tài)。重組酶/引物復合體開(kāi)始對雙鏈進(jìn)行掃描，當引物在模板上搜索到與之完全匹配的互補序列時(shí)，重組酶/引物復合體解體，DNA聚合酶結合到引物的3’端，開(kāi)始合成新鏈。合成的新鏈又可以作為模板，最終擴增產(chǎn)物以指數級增長(cháng)，完成靶標基因的擴增。本試劑盒具有快速、靈敏度高以及特異性強等優(yōu)點(diǎn)，反應組分已混合并冷凍干燥成反應干粉，操作簡(jiǎn)便，易于保存。

【引物設計】RAA核酸擴增技術(shù)對引物設計的要求與常規PCR引物設計有一定的區別。由兩條寡核苷酸組成一對引物， 分別特異性識別一個(gè)核酸目標物的上下游核苷酸序列；引物長(cháng)度在30-35nt之間，序列中無(wú)回文序列、連續單堿基重復序 列和內部二級結構區；引物Tm值不作為設計時(shí)主要考慮因素；最佳引物對需通過(guò)試驗優(yōu)化篩選得到，要求其擴增產(chǎn)物為單一條帶，無(wú)非特異性擴增和明顯的引物二聚體。

建議：在開(kāi)展RT-RAA （基礎型）擴增反應之前，先進(jìn)行引物的篩選試驗， 以便得到較高的檢測靈敏度。

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)：B8204C7 RNA恒溫快速擴增試劑盒（RT-RAA基礎型）.pdf (159.88 K)