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    替代PCR,RPA成為致病菌檢測的得力工具

    替代PCR,RPA成為致病菌檢測的得力工具

          在今年發(fā)表的一系列文章中,RPA技術(shù)被廣泛用于結核桿菌、耐藥菌MRSA、沙門(mén)氏菌等常見(jiàn)致病菌的檢測。在臨床診斷和食品安全方面,為人們提供了簡(jiǎn)單快速的實(shí)地篩查方案。


    RPA在臨床診斷領(lǐng)域的應用
          艱難梭狀芽孢桿菌(C.difficile)是一種會(huì )引起感染性腹瀉的重要致病菌。日前,研究人員以這種致病菌的毒力基因tcdB為靶標,開(kāi)發(fā)了一個(gè)低成本的微流體RPA平臺,文章發(fā)表在十月二十三日的《Analyst》雜志上。這個(gè)檢測C.difficile的RPA分析芯片只需要6.4μL的初始樣本,能夠對擴增反應進(jìn)行實(shí)時(shí)監控。

          據估計,世界上約三分之一的人體內潛伏著(zhù)結核?。═B)的致病菌,這些致病菌大多在肺部處于休眠狀態(tài)。改善檢測方法幫助TB診斷,被WHO列為公共建康的首要問(wèn)題之一。RPA作為一種常溫的快速DNA 擴增法,為資源匱乏的地區提供了檢測TB的簡(jiǎn)便工具。研究人員在RPA的基礎上,快速檢測了結核分枝桿菌復合群MTC的DNA(IS6110和IS1081)。在39°C的環(huán)境下,RPA檢測能在20分鐘內得出高靈敏度的結果。進(jìn)一步研究表明,在檢測TB感染者的肺部樣本時(shí),RPA檢測比熒光顯微鏡檢測還要準確。

          抗生素濫用現象使耐藥菌日漸增多,目前這已經(jīng)成為了一個(gè)全球性的公共健康問(wèn)題。作為一種重要且危險的致病菌,耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA一直是臨床治療中的棘手問(wèn)題。在對MRSA進(jìn)行DNA檢測的時(shí)候,引物只能靶標一個(gè)多變的染色體區域,SCCmec。今年七月的《Plos one》雜志上發(fā)表的一項研究,通過(guò)多重RPA反應篩查了726個(gè)MRSA分離物。研究人員通過(guò)二代測序發(fā)現,24個(gè)RPA未檢出的分離物中出現了新的插入突變,需要重新設計擴增引物。這一結果說(shuō)明,臨床上的MRSA篩查不能完全依賴(lài)DNA檢測。

         《Microchimica Acta》雜志今年二月的一項研究,展示了能夠同時(shí)擴增和檢測三種病原體的RPA芯片,包括淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)、沙門(mén)氏菌(Salmonella enterica)和MRSA。這種芯片可以在二十分鐘以?xún)韧瓿扇N病原體和對照質(zhì)粒的檢測,S.enterica和MRSA的檢出限可達10CFU,N.gonorrhoeae的檢出限可達100CFU。這項研究中的RPA芯片,有望成為實(shí)地篩查重要致病菌的簡(jiǎn)便工具。

    RPA在食品安全領(lǐng)域的應用

          產(chǎn)志賀毒素的大腸埃希菌STEC是世界范圍內最嚴重的一種食源性致病菌?!禙OODBORNE PATHOGENS AND DISEASE》雜志今年七月發(fā)表的一項研究,在RPA的基礎上首次建立了等溫實(shí)時(shí)的STEC檢測體系。研究人員設計并評估了一系列引物和熒光探針,實(shí)現了很高的特異性和靈敏度。

          沙門(mén)氏菌是一種主要的食源性致病菌?!禔nalytical Chemistry》雜志今年三月份發(fā)表的一項研究,將TwistFlow?沙門(mén)氏檢測整合到微流體裝置中,構建了檢測沙門(mén)氏菌DNA的一體化分析系統。這一微流體裝置整合了致病菌檢測的三個(gè)主要步驟(DNA提取、RPA擴增和結果檢測),能夠在三十分鐘內以全自動(dòng)的方式完成檢測。人們可以直接通過(guò)側流層析試紙條看到沙門(mén)氏菌檢測的結果。研究顯示,這種裝置。對PBS和牛奶的檢測下限分別為10CFU/ml和100CFU/ml。

           PCR-ELISA已經(jīng)是一個(gè)用途相當廣泛的成熟技術(shù)?!禔nalytica Chimica Acta》雜志今年二月發(fā)表的一項研究,首次用RPA取代了PCR,將快速的常溫擴增、生物素/鏈霉親和素體系、和比色法免疫分析結合起來(lái)。這種RPA-ELISA分析法可以用來(lái)篩查食品中的安全隱患,比如過(guò)敏原(榛子、花生、大豆、蕃茄和玉米)、轉基因成分(P35S和TNOS)、致病菌(Salmonella sp.和Cronobacter sp.)以及真菌(Fusarium sp.)。這項研究顯示,RPA-ELISA在上述應用中均得到了令人滿(mǎn)意的結果,有著(zhù)很高的靈敏度和可重復性。

    文章來(lái)源:http://www.biodiscover.com/news/research/115723.html

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