RPA(恒溫擴增)技術(shù)應用于腫瘤基因檢測
腫瘤基因相關(guān)基因檢測在癌癥早期診斷中意義重大。目前的檢測金標準為PCR和基因測序技術(shù),而這些技術(shù)大多需要精密的儀器和復雜的試驗流程,專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗人員配置。在現有的分子診斷技術(shù)中,以RPA為代表的核酸等溫擴增技術(shù)以其快速,靈敏,無(wú)需儀器等特點(diǎn),使突破以上壁壘成為可能。
近日,大連醫科大學(xué)劉元斌課題組發(fā)明一種無(wú)需任何儀器,實(shí)現快速檢測突變基因并肉眼識別的新方法,被稱(chēng)為AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。該方法以RPA(重組酶聚合酶恒溫擴增技術(shù))為基礎,加之PNA技術(shù)(肽核酸類(lèi)似物),并利用SYBR Green I核酸染料法顯色,肉眼即可判斷核酸擴增與否。
文章中,作者比較了在PCR,測序以及ARSP在非小細胞肺癌中EGFR突變檢測應用,發(fā)現在非小細胞肺癌細胞系中,5分鐘便能檢測到EGFR 19Del(2)缺失突變,10分鐘檢測EGFRL SNP 突變,實(shí)現肉眼快速判斷(圖1),并在組織樣本中同樣得到驗證(圖2)。
同樣,10到20分鐘之內成功檢測到EGFR點(diǎn)突變。與傳統的DNA測序方法相比較,ARPS有著(zhù)許多優(yōu)勢之處,包括時(shí)間短,成本低,操作簡(jiǎn)單,無(wú)需精密儀器等,而且,在基因組DNA樣本中,ARPS可以檢測到30%和40%的靶向突變位點(diǎn),靈敏度與測序相當(圖3)。之前有文章報道稱(chēng),RPA技術(shù)與末端熒光檢測和膠體金側流試紙條以及微流控芯片結合檢測EGFR突變,但還沒(méi)有類(lèi)似ARSP肉眼觀(guān)測法的應用。
然而,ARSP法同樣有待于進(jìn)一步優(yōu)化。比如,對于每一次EGFR檢測來(lái)說(shuō),檢測靈敏性和特異性都還有待提高;由于樣本量有限,現仍需更多的臨床樣本實(shí)驗進(jìn)行驗證。無(wú)論如何,在精準醫療大背景下,對于一些沒(méi)有條件購買(mǎi)測序儀,以及不具備專(zhuān)業(yè)操作能力的不發(fā)達地區和國家,這種快速簡(jiǎn)便,操作簡(jiǎn)單的,無(wú)需任何儀器的ARSP基因檢測法無(wú)疑為癌癥基因檢測提供有效參考,同時(shí)也為分子即時(shí)診斷領(lǐng)域(POCT)提供新的潛在解決方案。
文章鏈接:http://www.mdpi.com/1422-0067/17/5/792
國產(chǎn)化RPA試劑盒正在異軍突起,南京沃博生物科技有限公司作為安普未來(lái)生物科技有限公司江蘇省獨家代理。安普未來(lái)開(kāi)發(fā)的核酸恒溫擴增技術(shù)稱(chēng)為重組酶聚合酶擴增 (MIPA) 技術(shù)全系列可替代英國TwistDx Inc公司的RPA試劑盒TwistAmp Basic ,TwistAmp exo ,TwistA m p nfo,TwistAmp exo RT,TwistAmp Basic RT,Milenia Hybridtech 1 側向流試劑條。
運用安普未來(lái)開(kāi)發(fā)的核酸恒溫擴增試劑盒RNA恒溫快速擴增試劑盒(熒光型)并利用SYBR Green I核酸染料法顯色,肉眼就可以看出有無(wú)擴增。
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