細胞分選常見(jiàn)疑問(wèn)？？

問(wèn)題一

為什么建議磁珠分選而不是流式分選？

1)磁珠分選需要的設備簡(jiǎn)單，而流式分選需要配備分選型流式細胞儀，價(jià)格較為昂貴，而且流式分選對于操作員的技術(shù)要求很高，需要專(zhuān)門(mén)的培訓并有一定的經(jīng)驗后才能很好地完成流式分選；

2)磁珠分選所需要的時(shí)間遠小于流式分選所需要的時(shí)間；

3)磁珠分選對于目的細胞的刺激比流式分選要小，流式分選過(guò)程中需要對目的細胞所在的液滴通電，并且需要經(jīng)過(guò)一個(gè)強電場(chǎng)的區域，對目的細胞的刺激相對較大；磁珠分選只是讓細胞處于一個(gè)低磁場(chǎng)中，基本可以忽略對細胞的影響，從保持細胞活力的方面考慮，磁珠分選要優(yōu)于流式分選。

因此，如果磁珠分選可以滿(mǎn)足實(shí)驗需求時(shí)，應盡量選擇磁珠分選的方法。

問(wèn)題二

磁珠分選為什么要求細胞活性越高越好？

1)死細胞分泌DNA，DNA有粘性，會(huì )將磁珠標記細胞和非標記細胞粘在一起，如果是陽(yáng)選會(huì )影響純度，如果是陰選會(huì )影響得率。

2)細胞活性低時(shí)可能會(huì )影響抗原抗體的結合效率。

問(wèn)題三

磁珠分選buffer是什么？

autoMACS running buffer（自己配制：pH7.2 PBS，0.5％BSA、2mM EDTA，如需無(wú)菌，建議購買(mǎi)商品化buffer或紫外線(xiàn)照射，不建議高溫高壓滅菌）。

問(wèn)題四

如果想分選的細胞有多個(gè)陽(yáng)性marker怎么辦？

可以選擇磁珠分選陰選+陽(yáng)選的方法，eg.分選小鼠脾臟naive CD4+T可以先用陰選的方法分到CD4+T細胞再用CD62L磁珠陽(yáng)性分選；也可以用磁珠+流式的方法。

問(wèn)題五

分選柱可以二次使用嗎？

不建議，主要是分選柱內填充的鐵珠在使用后易生銹。

問(wèn)題六

 分選柱應如何選擇？

不同的試劑盒對于MS/LS/LD柱的最大細胞上樣量和最大磁性細胞吸附量是不同的，建議一定要參考說(shuō)明書(shū)；

此外，如分選的目的細胞較大（eg.巨核細胞或fibroblast），可考慮采用large cell colums。