當前位置： 首頁(yè) - 新聞中心 - 專(zhuān)業(yè)知識
磁珠分選- 方案A：MagniSort?陽(yáng)性分選
引言
下述方案是MagniSort?陽(yáng)性分選試劑盒的通用操作指南。具體請參見(jiàn)試劑盒內的說(shuō)明書(shū)。在陽(yáng)性分選中，待分選的細胞首先與生物素標記的抗體結合，然后被鏈酶親合素包被的磁珠捕獲。將細胞放入MagniSort?磁座后，陽(yáng)性細胞被磁場(chǎng)吸住，而陰性細胞仍游離在溶液中，可被棄掉。每個(gè)試劑盒中的生物素化抗體和磁珠預先已滴定好最適濃度，為即用型試劑。
注意事項
注：MagniSort? 5mL磁座可產(chǎn)生強磁場(chǎng)。應遠離心臟起搏器、信用卡、磁性身份卡、手表、計算機顯示器、硬盤(pán)等物品，以免損壞。
細胞制備
1. 在未特別說(shuō)明的情況下，MagniSort?陽(yáng)性分選試劑盒已優(yōu)化，適用于小鼠二級淋巴組織或正常人PBMC。
2. 用于小鼠細胞時(shí)，建議用40μm的尼龍細胞篩清除碎屑，以使試劑盒發(fā)揮出最佳效果。
3. 正常人PBMC的制備，參見(jiàn)“細胞制備-方案D：從全血中提取PBMC”（第28頁(yè)）。為使MagniSort?試劑盒發(fā)揮最佳性能，建議徹底洗滌白膜層，去除血小板。
4. 向緩沖液中加入EDTA減少細胞聚集。
后續用于無(wú)菌培養
1. MagniSort?陽(yáng)性分選抗體和陽(yáng)性分選磁珠中含有少量疊氮化鈉作為防腐劑。當使用不含疊氮化鈉的無(wú)菌緩沖液時(shí)，它不會(huì )影響細胞功能。需要根據測試判斷在特定實(shí)驗中的性能。
2. 分選無(wú)菌細胞時(shí)應該在超凈工作臺中進(jìn)行，并使用帶蓋的聚苯乙烯無(wú)菌試管和無(wú)菌緩沖液。
提供的材料
? MagniSort?陽(yáng)性分選抗體，200次試驗，20μL/次試驗。2-8°C貯存。
? MagniSort?陽(yáng)性分選磁珠，4mL。2-8°C貯存。
所需其他材料
? 細胞分選推薦使用的緩沖液：添加3%胎牛血清（FBS）和10mM EDTA的PBS或Hank平衡鹽溶液（HBSS）。2-8°C貯存。
? MagniSort?磁座，5mL。
? 12 x 75 mm流式管(5 mL，BD Falcon?，貨號352008或類(lèi)似產(chǎn)品)。
? 15mL離心管(BD Falcon?，貨號352099或類(lèi)似產(chǎn)品)
實(shí)驗步驟
1. 用適當的細胞分離液，制備濃度為1x107細胞/100μL（1 x 108/mL）的淋巴細胞懸液。
注：細胞必須制成單細胞懸液。實(shí)驗前需要檢查樣本，必要時(shí)用渦旋法或移液器去除細胞團塊。
2. 將所需數量的細胞（不能超過(guò)2 x 108個(gè)細胞）放入12 x 75 mm的5mL試管中。
3. 每100μL細胞中加入20μLMagniSort?陽(yáng)性分選抗體。渦旋5次混勻。室溫孵育10分鐘。
4. 加入細胞分離液洗滌細胞，使其總體積達到4mL，在300xg下離心5分鐘。
5. 棄上清，然后用細胞分離液完全重懸細胞至最初的體積。
注：細胞必須制成單細胞懸液，實(shí)驗前需要檢查樣本，必要時(shí)用渦旋或移液器去除細胞團塊。
6. 每100μL細胞中加入20μLMagniSort?陽(yáng)性分選磁珠。渦旋5次混勻。室溫孵育10分鐘。
注：為確保最佳性能，將MagniSort?陽(yáng)性分選磁珠加入細胞之前必須充分混勻。將設定為1mL的Pipetman? P1000移液器上下吹打5次，或者采用渦旋的方式完全重懸磁珠。7. 用細胞分離液將體積加至2.5mL。將設定為1mL的Pipetman?P1000移液器上下吹打3次，使其混勻。不能渦旋。
8. 將試管完全插入磁座中間的孔底，室溫孵育5分鐘。
9. 拿起磁座將試管內的上清液倒入廢液容器內；這些是不需要（未結合）的細胞。將試管倒置1秒鐘，然后回正。注：切勿吸干或搖晃倒置后的試管，否則會(huì )降低回收率。如果需要也可以收集起結合細胞。
10. 從磁座中取出試管并重復7-9步兩次，總共洗滌細胞3次。
11. 從磁座中取出含目標細胞的試管，加入1mL細胞分離液。沿著(zhù)試管側壁加入緩沖液，洗滌試管側壁。此時(shí)，試管內就是分選的陽(yáng)性細胞，備用。
磁珠分選 -方案B：MagniSort?陰性分選
簡(jiǎn)介
以下是MagniSort?陰選試劑盒的通用操作指南，該試劑盒適用于細胞進(jìn)行陰性分選。具體請參見(jiàn)每個(gè)試劑盒內的說(shuō)明書(shū)。在陰性分選中，不需要的細胞與生物素化抗體混合液結合，然后加入鏈霉親和素包被的磁珠。將細胞放入MagniSort?磁座后，不需要的細胞被磁場(chǎng)吸住，而需要的細胞游離在溶液中，將其倒出后即可使用。每個(gè)試劑盒中的生物素化抗體和磁珠已預先滴定好最適濃度，為即用型試劑。
注意事項
注意：MagniSort? 5mL磁座可產(chǎn)生強磁場(chǎng)。應遠離心臟起搏器、信用卡、磁性身份卡、手表、計算機顯示器、硬盤(pán)等物品，以免損壞。
細胞制備
1. 在未特別指明的情況下，MagniSort? 陰選試劑盒已經(jīng)過(guò)優(yōu)化，專(zhuān)門(mén)適用于小鼠二級淋巴組織或正常人PBMC。
2. 用于小鼠細胞時(shí)，建議用40μm的尼龍細胞篩清除碎屑，以使試劑盒發(fā)揮出最佳效果。
3. 正常人PBMC的制備，參見(jiàn)“細胞制備-方案D：從全血中提取PBMC”（第28頁(yè)）。為使MagniSort?試劑盒發(fā)揮最佳性能，建議徹底洗滌白膜層，去除血小板。
4. 緩沖液中加入EDTA減少細胞聚集。
后續用于無(wú)菌培養
1. MagniSort?陰選抗體混合液和陰性分選磁珠中含有少量疊氮化鈉作為防腐劑。當使用不含疊氮化鈉的無(wú)菌緩沖液時(shí)，它不會(huì )影響細胞功能。需要根據測試判斷在特定實(shí)驗中的性能。
2. 分選無(wú)菌細胞時(shí)應該在超凈工作臺中進(jìn)行，并使用帶蓋的聚苯乙烯無(wú)菌試管和無(wú)菌緩沖液。
提供的材料
? MagniSort?陰選抗體混合液，200次實(shí)驗，20μL/次試驗。2-8°C貯存。
? MagniSort?陰性分選磁珠，4mL。2-8°C貯存。
所需其他材料
? 細胞分選推薦使用的緩沖液：PBS或添加3%FBS和10mM EDTA的HBSS。2-8°C貯存。
? MagniSort?磁座，5mL
? 12 x 75 mm流式管(5 mL, BD Falcon?, 貨號352008或類(lèi)似產(chǎn)品)
實(shí)驗步驟
1. 用適當的細胞分離液，制備濃度為1x107細胞/100μL（1 x 108/mL）的單細胞懸液。
注：細胞必須制成單細胞懸液。實(shí)驗前需要檢查樣本，必要時(shí)用渦旋法或移液器去除細胞團塊。
2. 將所需數量的細胞（不能超過(guò)2 x 108個(gè)細胞）放入12 x 75 mm的5mL試管中。
3. 每100μL細胞中加入20μLMagniSort?陰選抗體混合液。渦旋5次混勻。室溫孵育10分鐘。
4. 用細胞分離液洗滌細胞，使其總體積達到4mL，300xg離心5分鐘。
5. 棄上清，然后用細胞分離液完全重懸細胞至最初的體積。
注：細胞必須制成單細胞懸液。實(shí)驗前需要檢查樣本，必要時(shí)用渦旋法或移液器去除細胞團塊。
6. 向每100μL細胞中加入20μL MagniSort?陰性分選磁珠。渦旋5次混勻。室溫孵育5分鐘。
注：為確保最佳性能，將MagniSort?陰性分選磁珠加入細胞之前必須充分混勻。將設定為1mL的Pipetman? P1000移液器上下吹打5次，完全重懸磁珠，不能渦旋。
7. 用細胞分離液將體積加至2.5mL。將設定為1mL的Pipetman?P1000移液器上下吹打3次，使其混勻。不能渦旋。
8. 將試管插入磁座中間的孔底，室溫孵育5分鐘。
9. 拿起磁座以連續的動(dòng)作將試管內的上清液倒入一支新的12x75 mm 5mL試管中并將磁座內的試管倒置1秒鐘，然后回正。
注：切勿吸干或搖晃倒置后的試管，否則會(huì )降低未結合細胞的純度。
10. 將磁座中的試管丟棄。
11. 此時(shí)，新5mL 12 x 75 mm試管中的陰性細胞即為分選后的目的細胞，備用。
相關(guān)產(chǎn)品
|
貨號 |
品名 |
規格 |
|
MAG-4902-10 |
5 mL |
|
|
8802-6833-74 |
200 tests |
|
|
MSNB-6002-71 |
25 tests |
|
|
MSNB-6002-74 |
200 tests |
|
|
8804-6810-74 |
200 tests |
|
|
8802-6831-74 |
200 tests |
|
|
8804-6867-74 |
200 tests |
|
|
MSPB-6003-71 |
25 tests |
|
|
MSPB-6003-74 |
200 tests |
|
|
8804-6829-74 |
200 tests |
|
|
8804-6821-74 |
200 tests |
|
|
8804-6837-74 |
200 tests |
|
|
8802-6861-74 |
200 tests |
|
|
8802-6842-74 |
200 tests |
|
|
8802-6841-74 |
200 tests |
|
|
8802-6832-74 |
200 tests |
|
|
8804-6820-74 |
200 tests |
|
|
8802-6849-74 |
200 tests |
|
|
8802-6848-74 |
200 tests |
|
|
8802-6863-74 |
200 tests |
|
|
8802-6817-74 |
200 tests |
|
|
8804-6816-74 |
200 tests |
|
|
8804-6815-74 |
200 tests |
|
|
8804-6864-74 |
200 tests |
|
|
8804-6827-74 |
200 tests |
|
|
8804-6828-74 |
200 tests |
|
|
8804-6819-74 |
200 tests |
|
|
8804-6802-74 |
200 tests |
|
|
8804-6822-74 |
200 tests |
|
|
8804-6836-74 |
200 tests |
|
|
8802-6860-74 |
200 tests |
|
|
8802-6840-74 |
200 tests |
|
|
8802-6830-74 |
200 tests |
|
|
8802-6835-74 |
200 tests |
|
|
8802-6847-74 |
200 tests |
|
|
8802-6865-74 |
200 tests |
|
|
8802-6834-74 |
200 tests |
|
|
8802-6862-74 |
200 tests |
|
|
8804-6824-74 |
200 tests |
|
|
8804-6825-74 |
200 tests |
|
|
8802-6843-74 |
200 tests |
|
|
8802-6844-74 |
200 tests |
|
|
8804-6812-74 |
200 tests |
|
|
8804-6811-74 |
200 tests |
|
|
8802-6846-74 |
200 tests |
|
|
8804-6814-74 |
200 tests |
|
|
8804-6813-74 |
200 tests |
|
|
8802-6838-74 |
200 tests |
|
|
8802-6870-74 |
200 tests |
- 上一頁(yè)： Polyplus病毒載體生產(chǎn)專(zhuān)用轉染試劑
- 下一頁(yè)： 細胞分選常見(jiàn)疑問(wèn)