新冠疫情尚未褪去，猴痘病毒又接踵而至。隨著(zhù)不同應用場(chǎng)景病毒檢測的需要，CRISPR分子診斷技術(shù)因其可與PCR、LAMP及RPA/RAA等多種核酸擴增手段高效對接，并具有病原物快速、準確鑒定的優(yōu)勢，在傳染病的即時(shí)檢測技術(shù)中迅速崛起，并成為科研及IVD行業(yè)中蓬勃發(fā)展的方向之一。

       目前市場(chǎng)上廣泛商業(yè)化的CRISPR核酸檢測試紙條僅能顯示單一報告分子的切割產(chǎn)物，因此雖然科研領(lǐng)域已經(jīng)形成大量重磅級別的研究成果，但仍然難以滿(mǎn)足IVD行業(yè)對同一樣品雙靶標陽(yáng)性的檢測需求，因而未能得到廣泛應用。

       Tiosbio聚焦體外診斷核酸檢測試紙條產(chǎn)品的“科技創(chuàng )新+先進(jìn)制造”，重磅推出了兩款基于CRISPR Cas的雙靶標核酸檢測試紙條新品：

1. 擴增產(chǎn)物及Cas酶切產(chǎn)物檢測試紙條（JY0307）

       JY0307適用于IVD病原物快檢試劑盒。內參基因的質(zhì)控通過(guò)雙鏈擴增產(chǎn)物的檢測線(xiàn)T2顯示，監控檢測流程中核酸釋放、擴增步驟是否正常工作；CRISPR信號探針切割產(chǎn)物的檢測線(xiàn)T1對標靶基因的信號放大過(guò)程，確保了靶基因高特異性和高靈敏度的檢測。

當CRISPR信號探針（檢測線(xiàn)T1）、雙鏈擴增產(chǎn)物（檢測線(xiàn)T2）做如下修飾時(shí)，即可使用JY0307進(jìn)行檢測——CRISPR信號探針的一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）；擴增產(chǎn)物一端修飾有地高辛（Dig），另一端修飾有羅丹明（TAMRA）。

       JY0307不同檢測線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)的顯色結果含義如下圖所示。

2. Cas12/Cas13雙酶切產(chǎn)物檢測試紙條（JY0308）

       JY0308適用于雙鏈產(chǎn)物在同一體系進(jìn)行Cas12和Cas13雙酶切后的產(chǎn)物檢測。當靶基因經(jīng)PCR、LAMP、RPA/RAA擴增后，在同一體系內，使用Cas12和Cas13酶同時(shí)對擴增產(chǎn)物進(jìn)行切割，Cas12酶對應的DNA信號探針A（Cas12切割），與Cas13酶對應的RNA信號探針B（Cas13切割）進(jìn)行如下修飾，即可使用JY0308進(jìn)行切割產(chǎn)物的檢測——其中，DNA信號探針A一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM），RNA信號探針B一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有地高辛（Dig）；或DNA信號探針A一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有地高辛（Dig），RNA信號探針B一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）。

       JY0308的特別之處在于，該產(chǎn)品為變色雙矯正顯色試紙條。當DNA信號探針A和RNA信號探針B均發(fā)生酶切反應，但酶切反應不完全的情況下，質(zhì)控線(xiàn)C、檢測線(xiàn)T1和檢測線(xiàn)T2均會(huì )顯色，其中質(zhì)控線(xiàn)C為紫色，檢測線(xiàn)T1為紅色，檢測線(xiàn)T2為藍色；當DNA信號探針A和RNA信號探針B完全酶切的情況下，只有檢測線(xiàn)T1和檢測線(xiàn)T2顯色，其中T1為紅色，T2為藍色。在探針A和探針B等摩爾濃度混合，且終濃度≤500nM時(shí)，帶有FAM標記的探針發(fā)生酶切反應，而帶有Dig標記的探針未被酶切時(shí)，僅有檢測線(xiàn)T1為紅色，質(zhì)控線(xiàn)C為藍色；帶有Dig標記的探針發(fā)生酶切反應，而帶有FAM標記的探針未被酶切時(shí)，僅有檢測線(xiàn)T2為藍色，質(zhì)控線(xiàn)C為紅色，從而達到互相矯正的目的。

       JY0308不同檢測線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)的顯色結果含義如下圖所示。