分子診斷在任何診斷實(shí)驗室中都是必不可少的。與此同時(shí)，快速檢測產(chǎn)品已經(jīng)成為公眾關(guān)注的焦點(diǎn)。Milenia HybriDetect是一個(gè)通用平臺，可用于基于側流免疫層析的快速診斷方法開(kāi)發(fā)。

什么是Milenia HybriDetect?

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Milenia HybriDetect是一種通用的側向流動(dòng)開(kāi)發(fā)平臺，供各研究人員開(kāi)發(fā)獨特的快速檢測方法。它是一個(gè)多功能的工具，可以檢測DNA, RNA，蛋白質(zhì)，多肽，抗體，代謝物，細胞等…

在過(guò)去的幾年里，核酸擴增和側流層析的結合已經(jīng)發(fā)展成為一個(gè)重要的診斷方法。通用型側向流動(dòng)裝置是快速診斷方法的必要組成。因此，Milenia HybriDetect非常適合在各種環(huán)境下進(jìn)行高敏感和高特異的核酸檢測。

目前，Milenia HybriDetect“家族”包含兩種試紙條，都包含一條質(zhì)控線(xiàn)，以確認分析的準確性。Milenia HybriDetect 包含一條測試線(xiàn)，而Milenia HybriDetect 2T包含兩條測試線(xiàn)。兩種試紙條基本上都是“裸露”的條帶，沒(méi)有包含在塑料外殼中，方便各種應用，例如將試紙條直接放在小型反應管，如96孔板或PCR管。

如何進(jìn)行側流免疫層析

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操作簡(jiǎn)單是側流層析方法除了穩定和省時(shí)之外最重要的優(yōu)點(diǎn)。將樣品直接應用于上樣區后，將HybriDetect放置在足夠體積的緩沖液中，幾秒鐘后，就可以看到金顆粒在整個(gè)分析膜上遷移。通常需要2到5分鐘，即可出現清晰的信號。Milenia HybriDetect試紙條也可直接放入樣品或含有樣品的緩沖液中。最終通過(guò)檢測線(xiàn)來(lái)判斷樣品的陽(yáng)性或陰性信息。

Milenia HybriDetect是如何工作的？

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Milenia HybriDetect可用于檢測多種帶有特定標記的靶分子。不論是核酸擴增產(chǎn)物還是蛋白、抗體，只要帶有標記就可以使用HybriDetect試紙條來(lái)檢測，因此該試紙條的應用場(chǎng)景是非常廣泛的。

圖1. Milenia HybriDetect的檢測原理

場(chǎng)景一：檢測擴增產(chǎn)物

HybriDetect通常用于DNA擴增產(chǎn)物的快速檢測。許多客戶(hù)會(huì )使用帶有Biotin、FITC/FAM修飾的引物，反應產(chǎn)物包含這些標簽，從而可以在HybriDetect試紙條上被檢測到。如PCR和多種等溫擴增技術(shù)(如LAMP-LFA)均可以和HybriDetect一起應用。此外，由于標記探針的特異性雜交，這種方法允許大量核酸(如核糖體RNA)的直接檢測（無(wú)需擴增）。

                                 圖2. 標記引物合并到擴增產(chǎn)物中，該產(chǎn)物可在Milenia HybriDetect的測試線(xiàn)(T)上檢測到

場(chǎng)景二：檢測報告基因

報告基因需要包含相關(guān)標簽(Biotin、FITC/FAM)。在檢測過(guò)程中，該報告基因以某種方式降解。報告基因的狀態(tài)可以利用Milenia HybriDetect進(jìn)行檢測。

                  圖3. 報告基因的檢測原理。雙標記報告基因在檢測反應中被降解。降解程度的增加與c線(xiàn)強度的增加相關(guān)。

基于報告基因的檢測方法在分子生物學(xué)應用中發(fā)揮著(zhù)越來(lái)越大的作用?；?/span>CRISPR/ CAS的分析(例如SHERLOCK或DETECTR)，利用HybriDetect，可以用于新型檢測方法的開(kāi)發(fā)。

場(chǎng)景三. 非競爭性(免疫)分析

在下面的例子中，使用了一種具有完全不同生物成分的分析策略。Milenia HybriDetect適合作為發(fā)展個(gè)體抗體為基礎的快速檢測的通用平臺。針對不同表位的特異性抗體必須用生物素和FITC/FAM進(jìn)行標記。這些一抗能夠結合靶標分子。

         圖4. 非競爭性(免疫)分析，標記抗體能夠特異性結合靶標分子，這種“三明治”結構可以HybriDetect試紙條上檢測到。

通過(guò)使用這種標記和檢測策略，已經(jīng)建立的免疫分析(如ELISA)可以很容易地轉化為側流層析檢測形式。

場(chǎng)景四. 競爭性（免疫）分析

在競爭性的LFAs中，信號的減弱或缺失與靶標分子的存在有關(guān)。檢測線(xiàn)強度的減弱表明陽(yáng)性結果。測試強度不變代表陰性測試結果。下圖說(shuō)明了使用Milenia HybriDetect進(jìn)行競爭性檢測的原理。

       圖5.競爭(免疫)分析法的原理。標記的靶標與未標記的靶標(在樣品中)競爭結合標記抗體。T線(xiàn)強度的降低與靶標分子的增加相關(guān)。

當然，HybriDetect試紙條作為一種通用型側流分析平臺，還有非常廣泛的應用場(chǎng)景。目前已發(fā)表的超過(guò)250篇引用文獻，涉及藥物開(kāi)發(fā)、獸醫、食品安全、農業(yè)研究、分子診斷試劑盒等等多個(gè)領(lǐng)域。