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轉染試劑主要作用是輔助將質(zhì)粒、DNA、siRNA、miRNA或蛋白質(zhì)等外源物質(zhì)輸送到細胞內部,目前已成為研究和控制真核細胞基因功能的常規試劑。令人擔憂(yōu)的是,現在市面上的轉染試劑種類(lèi)繁多,質(zhì)量參差不齊,那我們應該如何選擇一款最適用于自己實(shí)驗的轉染試劑呢?
昆蟲(chóng)細胞表達是一種用于產(chǎn)生具有簡(jiǎn)單翻譯后修飾的蛋白質(zhì)的平臺。瞬時(shí)轉染和重組桿狀病毒的產(chǎn)生是昆蟲(chóng)細胞表達的常用方法。TransIT-Insect是一種無(wú)動(dòng)物來(lái)源的轉染試劑,專(zhuān)門(mén)針對各種昆蟲(chóng)細胞類(lèi)型的高基因表達進(jìn)行了優(yōu)化。
轉染試劑主要作用是輔助將質(zhì)粒、DNA、siRNA、miRNA或蛋白質(zhì)等外源物質(zhì)輸送到細胞內部,目前已成為研究和控制真核細胞基因功能的常規試劑。令人擔憂(yōu)的是,現在市面上的轉染試劑種類(lèi)繁多,質(zhì)量參差不齊,那我們應該如何選擇一款最適用于自己實(shí)驗的轉染試劑呢?
昆蟲(chóng)細胞表達是一種用于產(chǎn)生具有簡(jiǎn)單翻譯后修飾的蛋白質(zhì)的平臺。瞬時(shí)轉染和重組桿狀病毒的產(chǎn)生是昆蟲(chóng)細胞表達的常用方法。TransIT®-Insect是一種無(wú)動(dòng)物來(lái)源的轉染試劑,專(zhuān)門(mén)針對各種昆蟲(chóng)細胞類(lèi)型的高基因表達進(jìn)行了優(yōu)化。
產(chǎn)品性能:
★ 特殊的DNA遞送—在昆蟲(chóng)細胞類(lèi)型中,包括Sf9、High Five™ 和S2
圖1. 使用TransIT®-Insect高效轉染桿狀病毒基因組DNA。6孔板里進(jìn)行轉染,每孔5 x 105 Sf9細胞,質(zhì)粒和轉染試劑比例1:3,使用0.5ug表達GFP的ProGreen™桿狀病毒表達載體(AB Vector)和0.1 µg的pVL1393 轉移載體(AB Vector). (A)轉染后6天使用Zeiss S100熒光顯微鏡拍攝熒光和相位對比圖像。(B) Merge。
圖2. TransIT®-Insect的性能優(yōu)于競爭對手的轉染試劑。昆蟲(chóng)細胞系(A)Sf9,(B)High Five™, 和(C)果蠅S2細胞,在96孔板中用0.1µg由hr5增強子/IE1啟動(dòng)子驅動(dòng)的熒光素酶表達質(zhì)粒進(jìn)行轉染,使用指定試劑以指定試劑與DNA的比例(µl:µg)轉染。在轉染后48小時(shí)測量螢光素酶的表達。Sf9和High Five™在無(wú)血
★ 桿狀病毒產(chǎn)量高—昆蟲(chóng)細胞中表達桿狀病毒的理想選擇
圖3. 使用TransIT®-Insect在High Five中的高效表達重組蛋白 。在6孔板中用2.5µg由hr5增強子/IE1啟動(dòng)子驅動(dòng)的GFP表達質(zhì)粒轉染進(jìn)High Five™ 細胞(Thermo Fisher Scientific) 。從轉染后72小時(shí)的細胞制備總可溶性細胞裂解物。通過(guò)SDS-PAGE和考馬斯藍染色分析來(lái)自100µl培養物的裂解物;cells alone(未轉
圖4. 使用TransIT®-Insect高效表達蛋白。昆蟲(chóng)細胞系(A) Sf9,(B) High Five™和(C)果蠅S2在96孔板中轉染 0.1 ug的熒光素酶表達質(zhì)粒,轉染試劑與質(zhì)粒的比例為2:1。在轉染后24、48和72小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測熒光素酶的表達。Sf9和High Five™細胞在無(wú)血清培養基中培養和轉染;S2細胞置于含血清的培養基中。
★血清兼容—無(wú)動(dòng)物來(lái)源的非脂質(zhì)體配方,
★性?xún)r(jià)比高—每次轉染所需的試劑量較低
產(chǎn)品信息:
Mirus 特色轉染試劑
·TransIT®-Insect Transfection Reagent 昆蟲(chóng)細胞專(zhuān)用轉染試劑,用于制備高滴度桿狀病毒
貨號 |
名稱(chēng) |
規格 |
MIR 6104 |
TransIT®-Insect Transfection Reagent |
0.4 ml |
MIR 6100 |
TransIT®-Insect Transfection Reagent |
1 ml |
MIR 6105 |
TransIT®-Insect Transfection Reagent |
5×1ml |
MIR 6106 |
TransIT®-Insect Transfection Reagent |
10×1 ml |
瞬時(shí)轉染和重組桿狀病毒制備是昆蟲(chóng)細胞表達常用方法,TransIT®-Insect 是一款專(zhuān)用于多種昆蟲(chóng)細胞系的高效 DNA 轉染試劑。
部分應用文獻展示:
#1:Establishment of a Pseudovirus Platform for Neuraminidase Inhibiting Antibody Analysis.International Journal of Molecular Sciences (2023) 24:2376
Cell line:sf21
#2:MicroRNA miR-274-5p Controls Melanotic Mass Formation and Developmental Growth by Regulating the Found-in-Neurons-JNK Signaling Axis in Drosophila.Preprints (2023).
Cell Type: S2
#3:Baculovirus actin-based motility drives nuclear envelope disruption and nuclear egress.Current Biology (2018).
Cell line : High Five
#4:miR-34-5p, encoded by Spodoptera frugiperda, participates in anti-baculovirus by regulating innate immunity in the insect host.International Journal of Biological Macromolecules (2022) 222:2190
Cell Type: S9
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