操作步驟：提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。

1) 每個(gè)干粉反應管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混勻，否則會(huì )對實(shí)驗效果產(chǎn)生影響）；

2) 每個(gè)反應管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物濃度10 μM，對于多個(gè)反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中）；

3) 向反應管中依次加入12.1 μL ddH₂O和2 μL核酸模板（可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積，并相應調整加入的ddH₂O體積，至模板與ddH₂O總體積為14.1 μL）;

4) 最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（請務(wù)必上下顛倒甩動(dòng)反應管8-10次進(jìn)行混勻；對于多個(gè)反應，建議將B buffer加至反應管的蓋子內側上下顛倒后混勻）；

5) 混勻后，將反應液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應管放入恒溫設備中37-39 oC孵育30 mins；

6) 反應結束后，加入50 μL酚/氯仿，1:1抽提反應液，12000 rpm離心5 mins，取5 μL上清進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

*正對照反應單元體系配制：正對照模板加入2μL，加入4 μL正對照引物Mix（包含上/下游引物），其他組分參照體系配制。

注意事項：

1． 由于試劑盒靈敏度非常高，在進(jìn)行反應時(shí)請注意避免核酸污染，并設置空白對照；

2． 使用時(shí)請取出實(shí)驗所需的MIRA反應單元的數量，剩余部分請置于存儲條件下。